西斯汀禮拜堂的天頂畫分佈在整個長方形大廳的屋頂，平面達 480 平方公尺。作品場面恢弘，刻畫震撼人心，是米開朗基羅的代表作。《創世紀》由「上帝創造世界」、「人間的墮落」、「不應有的犧牲」三個部分組成，每幅場景都圍繞著巨大的、各種形態坐著的裸體青年，壁畫兩側則是生動的女巫、先知和奴隸。
整個畫面氣勢磅礡，力度非凡，拱頂似因無法承受它的重量而在顫抖。其中「創造亞當」構思極富想像力；亞當倦怠身姿的曲線，與造物主和天使周圍的渦旋形線相呼應。畫面的焦點是神與人指頭的接觸，該作品強調人體動作，使二人之間的聯繫具有動感，這一聯繫以亞當所處地面的斜線和動作曲線為基礎。觀畫者目睹亞當悠閒地斜靠著，伸手去接觸那賜予他生命的上帝，而上帝則上前伸出右手食指，似乎將控制亞當的左手，兩個指尖即將接觸.迸發火花，成為《創世紀》的象徵。 整幅壁畫展現了一位藝術家用個人之力所能創造的最宏大作品，米開朗基羅為整體建築結構注入了生命，他將拱頂分隔開以組織畫面空間；在這空間中，他畫了 300 多個人物形象，代表著新柏拉圖理論中安魂的根源，以及其返回到上帝的主題。
在拱頂的最高部分.米開朗基羅用《創世紀》神話中的九個故事分別畫了九幅巨型濕壁畫。其中五個畫面稍小些，周圍有四個裸體人像各佔一角。這些畫面分別是：「諾亞之醉」﹝Drunkenness of Noah﹞、「諾亞獻 祭」﹝Sacrifice of Noah﹞、「創造夏娃」﹝Creation of Eve﹞、「分開海水與陸地」﹝Separation of the Earth from the Waters﹞以及「分開光明與黑暗」﹝Separation of Light from Darkness﹞。 另外四幅大一些的畫面被安排在幾對拱弧之間.即：「大洪水」﹝The Deluge﹞、「原罪與逐出樂園」﹝The Fall and Expulsion from Garden of Eden﹞、「創造亞當」﹝Creation of Adam﹞和「創造眾星」 Creation of the Sun. Moon. and Plants﹞。 先知則分別為以利亞(Elijah)、以賽亞(Isaiah)、耶利米(Jeremiar)、以西(Ezekiel)、丹尼爾 (Daniel)、約拿(Jonah)、彌迦(Micah)、喬爾(Joel)、阿摩司(Amos)、撒迦利亞(Zacharias)、庫蔓 (Cumana)、利比亞(Libyan)、菲西嘉(Persicha)、伊莉泰雅(Erithraea)和德耳菲(Delphic)。
